肿瘤微生物测序样本送样指南
1. 临床组织/动物组织采集
1) 无菌操作采集新鲜组织，组织体积要小，尽量长宽高≤0.5cm，考虑到可操作性，所切组织块的大小可参考绿豆颗粒的大小（50~100 mg）；以人为对象的研究，50例以上/组，以实验动物为对象的研究，8-10 例以上/组。
2) 去除非研究的组织类型（如结缔组织，脂肪组织等），如果是临床病变组织的取材要正确判断病变以及正常组织，应将病变组织周围的正常组织去掉，反之亦然。
3) 迅速用 2-6℃预冷无菌无核酸酶水配制的 1×PBS 或生理盐水清洗组织表面的血迹和污渍，使用无菌无尘纸巾吸干表面的液体
4) 处理好的组织迅速放入预冷好的已写好编号的无菌无核酸酶的带螺纹口的耐-192℃超低温冻存管中，迅速置于液氮速冻 1 小时后转存于-80℃长期保存，在 DNA 提取前避免反复冻融。
5) 由于组织中菌含量较低，而样本采集操作中难以避免受到外界菌的污染，需要在采集实验样本的同时，也采集阴性对照样本，具体方法见 3。
6) 寄送样本时，请按样本序号顺序或是样本分组分袋存放，以便公司收样时快速核对样本信息和数量。
2. FFPE样本
1) 手术/活检组织石蜡卷片
从医院病理科切取组织厚度≥10μm 的石蜡卷片，手术组织 3~5 张，穿刺组织6-10 张。将切好的卷片放置于 1.5mL 无菌无酶离心管中，每管最多放置 5 张，用封口膜将管盖封好，并在管壁上写好样本编码。
2) 手术/活检组织石蜡切片
从医院病理科切取组织厚度≥10 μm 的石蜡卷片，手术组织 3-5 张，穿刺组织6-10 张。将切片平整放置在经过防脱处理的粘附载玻片中心位置，以样本区域无褶皱、气泡或明显刀痕为准。将贴片放置于专用的病理切片盒中，在贴片盒盖与盒身各写上样本编码。
3) 不管上述哪种方式，石蜡样本中都不可避免的存在外界污染菌的干扰。需要在采集石蜡样本时，也采集阴性对照样本，具体方法见 3。
3. 组织样本从采样到文库制备需设置空白对照
建议不同的样本组或处理应随机进行，而不是单独操作。研究人员应戴一次性实验手套，
戴口罩， 避免皮肤裸露，以减少污染 DNA 进入样本。应将尽可能多的流程 (如样本转移、DNA 提取、文库制备以及测序 ) 放在清洁、独立的工作环境中进行，而使用到的设备和耗材都应经过必要的去污染处理（酒精或紫外消杀）。
在对组织等低微生物量样本进行菌群测序时，需要在多个实验环节上设置对照，与实验样
本一起做 DNA 提取、PCR 扩增、测序和数据分析，以便与实验样本对比，去除污染菌。
①采样端阴性对照
主要用于检测采样过程可能引入的污染菌，包括采集组织的器具、试剂耗材和空气中可能引入的污染菌。如果不能每个环节都设置阴性对照，建议至少设置空白对照管（1.5mL 无菌离心管）来采集采样环境中的污染菌，在采样时打开管口，采样结束时关闭管口。为了鉴定污染菌的准确性，请设置 5 个以上的空白对照管（即5 个以上的阴性对照样本）。对于 FFPE 样本的阴性对照样本：如果不能每个环节都设置阴性对照，请优先切取 FFPE 样本边缘没有包埋组织的空蜡片作为阴性对照样本，请采集 5 个以上的 FFPE 样本边缘的空蜡片作为阴性对照样本。
②实验端：DNA 提取阴性对照
设置空白样本管，与实验样本一起进行 DNA 提取，检测 DNA 提取试剂盒、耗材和实验室环境中可能存在的污染菌。建议设置 5 个空白对照样本。由联川实验室设置。
③实验端：无模板扩增阴性对照（NTC）
设置不加 DNA 模板的空白样本管，检测 PCR 试剂和 PCR 环境中可能存在的污染菌。建议设置 5 个 NTC 样本，使其与实验样本一起进行 PCR 扩增处理。由联川实验室设置。
4. 样本运输
1) 24 小时到达公司实验室的，干冰总量不得低于 5 公斤；48 小时到达的，干冰总量不得低于 8 公斤。夏季可以适当多增加一些干冰。建议使用小的圆柱体干冰具有较好的保冷效果，且不会压破压碎样本管。
2) FFPE 样本可根据季度实际温度选择在常温或冰袋条件下运输；建议每个贴片盒中只存放一个患者的样本；若需与其他患者样本放在一起，需做间隔区分，防止样本接触造成污染。