Astral-DIA样本送样建议
1动物组织
①根据研究目的取特定位置组织,去除非研究所需的组织类型;考虑到可操作性,将组织分割成长宽高≤0.5cm的小块,可参考绿豆颗;
②用预冷PBS 或生理盐水清洗组织上的污渍,吸水纸吸干表面液体;
③处理好的组织分装入预冷的耐-192℃超低温螺纹口冻存管中,液氮速冻,-80℃长期保存(避免反复冻融),干冰运输。
2培养细胞
a.悬浮细胞
①培养基转移至离心管中,4℃ 400g-1000g离心5-10min,去上清;
②用预冷PBS 洗2-3 次,离心去上清;
③预冷的耐-192℃超低温螺纹口冻存管中,液氮速冻,-80℃长期保存(避免反复冻融),干冰运输。
b.贴壁细胞
① 去除培养基,用预冷PBS洗2-3次,去除残余培养基;
② 培养皿置于冰上,加入预冷PBS,用细胞刮将细胞刮于一侧,吸取至离心管中,4℃ 400g-1000g离心5-10min,去上清;
③ 预冷的耐-192℃超低温螺纹口冻存管中,液氮速冻,-80℃长期保存(避免反复冻融),干冰运输。
3 液体类
a. 血清
①收集全血样本至真空采血管中(红色头盖),上下轻轻颠倒5-10次;
②室温静置30min凝固分层,4℃ 1500-2000g离心10min;
③将上层血清转移至预冷离心管中;
④分装至预冷的耐-192℃超低温螺纹口冻存管,液氮速冻,-80℃长期保存(避免反复冻融),干冰运输。
c.血浆
①收集全血样本至EDTA抗凝管中(紫色头盖);
②上下轻轻颠倒5-10次后,立即4℃ 1500-2000g离心10min;
③将上层血浆转移至预冷离心管中;
④分装至预冷的耐-192℃超低温螺纹口冻存管,液氮速冻,-80℃长期保存(避免反复冻融),干冰运输。
注意事项:
1)血清参考得率:30%~50%(例如:1mL全血大约能得0.3~0.5mL血清),血浆参考得率:约50%(例如:1mL 全血大约能得 0.5mL 血浆);
2)分离血清血浆应严格按照操作说明进行,操作需在尽量短时间内完成(2h),避免出现溶血现象;
3)血清血浆样本中包含白蛋白等高丰度蛋白,会影响低丰度蛋白的检出;LabelFree和TMT项目需每样本去除高丰度蛋白,DIA可选择,方法使用ProteoMinerTM Protein Enrichment Kits (Bio-Rad)等试剂盒;
4)冷冻全血已不可用于血清/血浆分离。
红色头盖真空采血管 紫色头盖EDTA采血管
c. 脑脊液/淋巴液/关节液/胸水/腹水/灌洗液等
①收集液体样本,4℃ 1000-2000g离心5min;
②将上清分装至预冷的耐-192℃超低温螺纹口冻存管,液氮速冻,-80℃长期保存(避免反复冻融),干冰运输。
d.唾液
①取样前禁止进食、吸烟、嚼口香糖等2h以上,建议上午9:00-12:00取样,使用吐取法先在口腔中分泌唾液再吐于采集管中,重复至收集足量样本,4℃ 1000-2000g离心5min;
②将上清分装至预冷的耐-192℃超低温螺纹口冻存管,液氮速冻,-80℃长期保存(避免反复冻融),干冰运输。
e.泪液
①使用毛细管收集泪液于预冷离心管中,4℃ 8000-14000g离心5min;
②将上清分装至预冷的耐-192℃超低温螺纹口冻存管,液氮速冻,-80℃长期保存(避免反复冻融),干冰运输。
f. 尿液
①采集受试者晨起或晨间1h的中/后段“新鲜”尿液,于4℃临时保存 (不得超过8 h),注意避免细菌污染,收集前注意对饮食的控制;4℃ 3000 g 离心 30min;
②将上清分装至预冷的耐-192℃超低温螺纹口冻存管,液氮速冻,-80℃长期保存(避免反复冻融),干冰运输。
g. 细胞上清
①收集前需更换为无血清培养基;对于贴壁细胞,先去除原有培养基,加入适当的 PBS/无血清培养基清洗细胞 1-2 次;对于悬浮细胞,4℃ 300g离心10 min 收集细胞,加入适当的 PBS/无血清培养基清洗细胞 1-2 次;
②继续加入无血清培养基培养一段时间,根据实验设计或细胞的生长状态确定时间收取上清;
③4°C 300g离心10 min,吸取上清;再4°C 3000g离心 10 min,确保将细胞或细胞碎片去除干净;
④将上清分装至预冷的耐-192℃超低温螺纹口冻存管,液氮速冻,-80℃长期保存(避免反复冻融),干冰运输。
4 植物组织
①根据研究目的取特定部位组织(如整株、根、茎、叶等,及蕨类和苔藓的其他组织),去除非目标组织,如组织过大/过小则根据需要进行分割或混样;
②处理好的组织迅速放入预冷的耐-192℃超低温螺纹口冻存管中或用锡箔纸包裹好,液氮速冻,-80℃长期保存(避免反复冻融),干冰运输。
注意事项:
1)所取样本如有污渍(如根),可用软毛刷和PBS清洗干净,并用吸水纸吸去表面液体;
2)不同个体需收集相同部位且生理状态相近的,如同一叶位、根生长位、花的展开程度、果实的颜色等;
3)较大的组织部位如需混样,送样前提前分割成小块混好;
4)成熟度较高的果实、或者含油脂、淀粉含量比较高的组织,建议加大送样量。
5 微生物和藻类
a. 大型真菌和藻类
①根据研究目的取特定部分(如真菌的菌盖、菌柄、孢子等,藻类叶状体、假根等),去除非目标组织,如组织过大/过小则根据需要进行分割或混样;
②处理好的组织迅速放入预冷的耐-192℃超低温螺纹口冻存管中或用锡箔纸包裹好,液氮速冻,-80℃长期保存(避免反复冻融),干冰运输。
b. 培养的真菌、细菌和微藻
①固体培养基培养时,可从培养基上刮取菌落,尽可能避免取到培养基;
②液体培养基培养时,通过离心收集菌体,并用PBS清洗1-2次;
③收集菌体转入预冷的耐-192℃超低温螺纹口冻存管中,液氮速冻,-80℃长期保存(避免反复冻融),干冰运输。
c. 真菌、细菌和微藻培养液
①根据研究目的培养一定时间后,离心收集上清,如有条件可用0.22μm过滤;
②分装入预冷的耐-192℃超低温螺纹口冻存管中,液氮速冻,-80℃长期保存(避免反复冻融),干冰运输。
