空间单细胞蛋白质组学PCF(CODEX)样本准备指南

1 适用范围

PCF（原CODEX）空间蛋白组技术采用超多重抗体进行蛋白的杂交和表达检测，其肿瘤免疫学panel（IO60）适用人的FFPE样本。芯片大小为18mm×35mm，组织样本要求常规手术组织样本，对于穿刺样本需要拼片或其他特殊样本需另行沟通评估。

2 石蜡包埋组织块或石蜡蜡膜

石蜡包埋组织块或石蜡蜡膜两种方式任意一种均可，优先建议石蜡包埋组织送样。

2.1 石蜡包埋组织块

推荐2年内避光4℃保存样本，建议厚度2-5mm，石蜡块表面封蜡后封装常温或4℃寄送至联川生物实验室。

以下罗列实际实验过程需要消耗的切片数量：

（1）H＆E染色选片：1-2片5µm厚度切片用于染色质检；

（2）正式试验表达：1-2片5µm厚度表达切片。

2.2 石蜡蜡膜

2.2.1. 蜡膜制备及寄送指南 

(1) 蜡膜切片厚度为 5μm。注意：不需要在水中展片！

(2) 切片须保持平整无皱褶、无裂痕（各实验室切片方法有别，可以借鉴：低温冰冻蜡块表面，切片不易卷曲打褶；快速，匀速摇切不易打褶；勤换刀片）。

 

(3) 切片放置在较宽松器具里，以 6 孔培养板为最佳选择，每孔放置 1 张组织蜡膜，培养板应置于冰板上保障低温，避免蜡膜粘附。如选用试管，最小应不小于 50ml 试管，管径越宽越好，不可委屈样本蜡膜。其他器皿也可。优先建议细胞孔板。

(4) 切片轻轻从镊子或毛刷脱离，放置在孔板中，置于孔板中后不要再对蜡膜做频繁的移动、铺设动作，尤其不要尝试重新将组织展开贴于底部，容易导致组织粘附在塑料表面。

 

(5) 参考视频另行发送。

(6) 切片后尽快放置于低温干燥环境中，在实验室里可以放-20℃低温保存；高温环境更容易使切片蜡膜软化粘附于周围器具壁，造成组织蜡膜不可用。

(7) 以胶带完整缠绕 6 孔板，其他管、瓶等器具拧紧瓶盖，使之不能因低温、 干冰融化和空间增大而自动开盖，其他封口膜等材料会因低温失效；在泡沫箱内加干冰，争取 2000 公里的邮递路途干冰没有完全融化，尤其南方地域，通常需要 10-15 公斤干冰，或者冷链运输；固定存放蜡膜器具，避免运输过程中过度撞击导致蜡膜破裂。

 

2.2.2 石蜡蜡膜：拼片正式实验要求

    

3 石蜡样本质检标准

组织形态质检

组织切面完整，厚薄平均，切片无明显刀痕、裂隙，切片平坦无皱褶、折叠，无污染物（血液残留等）；无气泡；细胞核与细胞质染色清晰明显，切片无松散，表达区域满足客户需要。

 

通过HE染色判断组织是否存在坏死有助于后续实验风险进行评估