免疫组TCR _BCR测序样本送样指南
免疫组 RNA 测序样本类型：全血、组织、PBMC、分选细胞、RNA
免疫组 DNA 测序样本类型：全血、组织、PBMC、分选细胞、DNA、FFPE
1.全血样本
推荐使用 EDTA 或 ACD 抗凝的采血管（一定不能使用肝素抗凝，肝素严重影响下游建
库工作）收集外周血样品，需 5mL 左右。新鲜全血样品 4℃保存，冰袋运输，2-3 天内寄达，
勿冻。
注意事项：①考虑每个病人血液中淋巴细胞数量不同，且 T 细胞含量不同，为确保样品足量有效， 故要求血样量不能低于 5mL。
②全血样本尽量当天采集当天寄出，最晚 3-5 天内需要处理。
③采用 RNA+5RACE 的建库方法，RNA 上样量常规使用 3μg，若无法达到 3μg，根据 浓
度和体系上样本最大量，最低需要 1μg。
④全血样本不建议直接冻存，因为冻融过程中会死掉大量细胞，影响核酸提取，尤其会
影响 RNA 的降解。
2. 组织样本
新鲜手术或穿刺组织 5mg 以上，
①迅速放入到液氮中（适合 DNA 或 RNA 提取）， -80℃保存，干冰运输；
②迅速放到RNAlater保存液中，需浸没组织，冰袋运输即可。
注：①组织样本内不确定 T/B 细胞含量，且分布不均，无法保证结果，新鲜组织样本首选
建议处理成单细胞悬液样本后送样（细胞数量要求≥ 1×106个细胞）。
②采用 RNA+5’RACE 的建库方法，RNA 上样量常规使用 3μg，若无法达到 3 μg，根据浓度
和体系上样本最大量，最低需要 1μg。
3. FFPE 样品
FFPE 送样要求：5-10 白片，常温运输
注：FFPE 仅能提取 DNA。DNA 上样量常规使用 3ug，若无法达到 3ug，根据浓度和体系上 样
本最大量。
4. PBMC 样品
提取 PBMC，细胞数量要求≥ 1×106个细胞。 送样方法：
①将细胞保存于 Trizol 中（适合 RNA 提取）。步骤：向细胞沉淀中加入 trizol，每
1×105—1×107个细胞加 0.5-1mL即可，再吹匀打散，确保细胞充分接触， -80℃保存，干冰
运输寄送。
②将细胞保存于细胞冻存液（适合 DNA 或 RNA 提取）中，可使用的细胞冻存液有如下选
择类型： 市面上销售的成品细胞冻存液或自制细胞冻存液（冻存液常规配比为培养基：血
清：DMSO=7:2:1，如果细胞比较珍贵，可以调整为血清：DMSO=9:1）， -80℃保存，干冰运
输寄送。
注意事项：采用 RNA+5RACE 的建库方法，RNA 上样量常规使用 3μg，若无法达到 3ug，根据浓 度 和体系上样本最大量，最低需要 1ug。
5. 冻存分选细胞
需提供分选好的细胞，细胞数量要求≥ 2×105 个细胞。 送样方法： 同上PBMC样本
6. 微量分选新鲜细胞（注：仅限同城。）
体积>50μL（PBS溶剂），细胞浓度>100 个/μL，细胞数量要求≥5×103个细胞。
送样方法：运输过程中保持管子竖立状态，不要倒，确保细胞保存于液体中，另外，确保液体中只有 PBS 这一种溶剂，4℃运输，并且在当天送达实验室
7. RNA 样品要求及送样建议
总 RNA 量＞1μg，RNA 体积＞20μL（含 5-7μL用于质检），浓度等其它要求如下：
将 RNA 样品转移至洁净 1.5mL EP 管，-80℃保存，干冰运输。
8.DNA 样品要求及送样建议
总 DNA 量＞1μg，DNA 体积＞20μL（含 2ul 用于质检），浓度等其它要求如下：
将 DNA 样品转移至洁净 1.5mL EP 管，-80℃/-20℃保存，干冰运输。
注意事项：
a. 实验上样量基本要求： DNA 量常规一般使用 3μg（如达不到，就按送样量加，最低量要
求 100ng）。
b. 组织及细胞中 DNA 质检浓度要求依据实验室检测经验而定；
c. 石蜡包埋样本（1）合格标准：限于石蜡样本质量因素，提取 DNA 达不到常规样本要求质量（70ng/μL），为能对更多样本做此项目检测，故降低标准；风险标准：限于石蜡样本质量因素，最低要求，是比常规样本浓度要求要高，进而才能做此项目检测。
9.其它物种，样品要求及送样建议
1. 小鼠一般采集至少 200μl 左右的抗凝外周血，裂红处理，PBS 洗一至两遍，弃上清，细胞
沉淀加 500ul 的 Trizol，涡旋混匀后-80 冻存（可以在混匀后加一步液氮速冻，之后再-80
冻存），干冰寄送。