三代全长转录组测序样本送样指南
1、样品包装
从液氮或-80 °C 冰箱取出的组织样品 (建议用冻存管存放组织样品；若选用弹开式离心管放置样品，请确认已用 Parafilm 密封管口) ，植物样品若使用锡纸包送样，需在锡纸包放入自封袋中，并在自封袋上标注样品编号。请选用保温性好的泡沫盒 (建议壁厚 2 公分以上)进行样品存放，准备大约 8~ 10 公斤块状干冰 (干冰易挥发) 以提供低温保存环境。不同提取样本请务必分开包装：
例 1 ：一株植物根、茎、叶均提取，在送样前务必将此3类组织分开包装；
例 2 ：果肉和种子提取，请务必在样品液氮速冻前将种子和果肉分开包装速冻。
对于样品数量较多的项目请按名称或信息单中样品顺序按每 5- 10 个样品的小包进行一个中包，最后将中包汇总成一个大包，方便后续统计。
2 、细胞样本送样要求
贴壁细胞的处理：
1) 从培养箱取出贴壁细胞，显微镜下观察细胞形态，确定生长状态良好无污染后，弃培养基；
2) 加入与培养基等体积的无酶水配制的1×PBS ，静置 1min ，吸弃PBS ，重复一次；
3) 加入适量裂解液轻柔反复吹打至充分裂解；
注： 以TRIzol Reagent (Invitrogen ，15596-018) 为例，10- 15cm 的大皿，每次先添加 1mL，吹打混匀，裂解充分的标准为吹打时液体不粘稠，流动性好。如果液体过于粘稠说明还未裂解充分，需继续添加裂解液，每次添加的量建议为100uL左右持续添加，直到液体不粘稠为止；
4) 转移至耐- 192℃低温的螺纹口冻存管后，-80℃冰箱长期保存，干冰运输；
5) 全长cDNA细胞总量≥ 1
X
107 个起送，DRS细胞总量≥5
X
107 个起送。
悬浮细胞的处理：
1) 选取生长状态良好的细胞悬液；
2) 1000g 4℃离心10min ，得到细胞沉淀弃培养基 ；
3) 加入适量RNase-Free水配制的1×PBS后，宽口枪头轻柔吹打重悬细胞沉淀，然后1000g 4℃离心5min ，弃PBS ，重复一次；
4) 加入适量TRIzol裂解液反复吹打至充分裂解 (裂解标准同上面的贴壁细胞处理方式类
似) ；
5) 转移至耐- 192℃低温的螺纹口冻存管后，-80℃长期保存，干冰运输。
6) 全长cDNA细胞总量≥ 1
X
107个起送，DRS细胞总量≥5
X
107个起送。
a. 勿将干冻的细胞直接寄送， 因为细胞冷冻的过程中冰晶很容易刺破细胞，破碎的细胞更容易发生RNA降解；
b. 细胞样品勿用胰酶消化，胰酶会消化细胞膜上的膜蛋白，导致细胞破裂，破裂的细胞会释放核酸酶；
c. 如果不经过TRIzol处理，则样本准备完成后立即放入液氮速冻10min 以上，然后足量干冰运输。
3 、组织样本送样要求
3.1 植物组织
较老组织RNA含量低，次生代谢物含量相对较高，所以尽量选择健康、幼嫩的新鲜组织样本，采样流程如下：
1) 用70%酒精将样本表面的杂质冲洗干净，吸水纸蘸干，再取新鲜组织；
注：如果是活体取样，尽量在活体上进行前处理后再取样。
2) 如果组织体积较大，将组织剪切成小块；
3) 全长转录组送样量须达到至少0.5g ，DRS送样量须达到至少2g；将处理好的组织样本保存于2 mL或更大体积的EP管中或使用锡箔纸包裹组织，标注信息。
4) 迅速置于液氮中冷冻20min
以上，然后单个样品放于自封袋中，转移至-80 °C长期保存；
5) 运送方式：足量干冰运输。
注意事项：
1 、优先选用新鲜采集的样品活株送样；
2 、新鲜，幼嫩，特别是林木类的物种更加要新鲜幼嫩；
3 、不要直接将叶片组织放在自封袋；
4 、做好预处理，要分管送，避免处理的时候反复冻融。
3.2 动物组织/ 临床样本
1) 取新鲜组织，组织体积要小，尽量长宽高≤0.5cm ，所切组织块的大小可参考绿豆颗粒的大小， 送样量须达到至少0.2g；
2) 去除非研究的组织类型 (如结缔组织，脂肪组织等) ，如果是临床病变组织，要正确判断病变以及正常组织，将病变组织周围的正常组织去除干净，反之亦然；
3) 迅速用 2-6℃预冷 RNase-Free 水配制的 1 ×PBS 或生理盐水清洗组织表面的血迹和污渍，使用无尘纸巾吸干表面的液体；
4) 处理好的组织迅速放入预冷好的已写好样本信息的 RNase-Free 的带螺纹口的耐
- 192℃超低温冻存管中，置于液氮速冻1小时后于-80℃长期保存；
5) 足量干冰运输，在RNA提取前避免样本反复冻融。