EM-seq样本送样指南
1. 动物组织/临床组织采集
① 取新鲜组织（ 50~100 mg ），组织体积要小 ，尽量长宽高≤0.5cm ，考虑到可操作性 ，所切组织块的大小可参考绿豆颗粒 的大小
② 去除非研究的组织类型（如结缔组织 ，脂肪组织等），如果是临床病变组织的取材要正确判断病变以及正常组织 ，应将病 变组织周围的正常组织去掉 ，反之亦然。
③ 迅速用 2-6℃预冷 Nuclease-Free 水配制的 1 × PBS 或生理盐水清洗组织表面的污渍 ，吸干表面的液体
④ 处理好的组织迅速放入预冷好的已写好编号的 Nuclease-Free 的带螺纹口的耐-192 ℃超低温冻存管中 ，液氮速冻 1 h 后于-80 ℃长期保存,在 DNA 提取前避免反复冻融。如只做 DNA实验 ，没有条件的情况下可以不做液氮速冻 ，直接-80 ℃ 冻存。
注意事项：
a. 如果实验室没有条件，如缺乏液氮、干冰以及-80 ℃冰箱等条件下，需要 DNA Locker及类似组织保存液保存的样本，严 格按照操作说明进行，组织块需切成长宽高为0.5 cm 的小块，组织块过大会影响 DNA Locker 渗透入组织内部的效率，组 织块过大也会造成 DNA Locker无法完全覆盖组织，而未被 DNA Locker覆盖的组织部位极易被核酸酶降解；
b. 不允许寄送用裂解液保存的组织样本，因为实验中发现用Trizol保存的组织样本，无论是研磨好的粉末还是切割好的组 织块，所抽提的DNA 质量普遍很差；
c. 动物及临床组织不要使用锡箔纸包裹，锡箔纸容易与动物及临床组织粘一起，DNA 抽提的过程锡箔纸容易带入，引起污染。
2. 细胞样品的采集
贴壁细胞的处理 ：
① 从培养箱取出贴壁生长细胞（ 3~5 × 106 个细胞），显微镜下观察细胞确定生长状态良好。弃培养液。
② 加入无酶水配制的 1 × PBS 后 ，平放轻轻摇动 1 min 洗涤细胞 ，然后弃去 PBS ，洗 2 次以洗去培养液
③ 将培养皿置于冰上。向培养皿内加入 4 ℃预冷的 PBS。用干净的细胞刮棒将细胞刮于培养皿的一侧（动作要快），冰上 斜置培养皿 ，使得缓冲液流向一侧。移液管吸取至预冷的离心管内。200-1000g 离心 5 min-10 min 去上清
④ 转移至耐-192℃低温的螺纹口冻存管 ，液氮速冻 1 h 后 ，转移至-80 ℃冰箱长期保存或通过干冰运输寄出。如只做 DNA 实验 ，没有条件的情况下可以不做液氮速冻 ，直接-80 冻存
悬浮细胞的处理 ：
① 选取生长状态良好的细胞悬液（ 3~5 × 106 个细胞）
② 200-1000 g 离心 5-10 min ，得到细胞沉淀弃培养基。
③ 加入 3 mL Nuclease-Free 水配制的 1 × PBS 后 ，悬起细胞沉淀 ，然后用 200 g 离心 5 min ，弃 PBS ，洗 2 次。
④ 转移至耐-192℃低温的螺纹口冻存管 ，液氮速冻 1 h 后 ，-80 ℃长期保存或通过干冰运输寄出。如只做 DNA 实验 ，没 有条件的情况下可以不做液氮速冻 ，直接-80 ℃冻存。
3. 植物组织组织采集
① 选取新鲜、幼嫩、生长旺盛的组织部位（ 200~300 mg ），植物组织越幼嫩越新鲜所含的次生代谢产物越少 ，随着植物 的逐渐成熟 ，所含的次生代谢产物产量越来越多 ，而次生代谢产物会影响 DNA 的抽提
② （部分植物样本可选做）迅速用预冷的 Nuclease-Free 水配制的 1 × PBS 或生理盐水清洗组织表面的污渍 ，吸干表面的 液体。用剪刀剪切成合适的大小（若非特殊情况 ，长度最好不要超过 10 cm ）
③ 处理好的组织迅速放入预冷好的已写好编号的 Nuclease-Free 的耐-192 ℃低温的螺纹冻存管中 ，或用标记好名称的锡 箔纸包裹好 ，液氮速冻>1 h ，转移到-80 ℃长期保存 ，在 DNA 提取前避免反复冻融 ，干冰寄送样本。如只做 DNA 实 验 ，没有条件的情况下可以不做液氮速冻 ，直接-80 ℃冻存。
4. 全血/外周血样本搜集
紫色EDTA采血管
紫色 EDTA 采血管采集方式 ：
① 样本采集前 ，先用 75%的酒精棉由内向四周对采血部位进行消毒 ；
② 采血 2~5 mL 至特定的采血管中 ，数量达到负压允许的最大值 ；
③ 样本采集完成后 ，立即轻柔颠倒混匀 10 次。动作尽可能平缓 ；
④ 混匀完毕后 ，转入耐-192℃低温的螺纹口冻存管 ，液氮速冻 1 h 后 ，转入-80℃冰箱保存 ，干冰运输。如只做 DNA 实 验 ，没有条件的情况下可以不做液氮速冻 ，直接-80 ℃冻存。
5. 石蜡组织
手术/活检组织石蜡块
从医院病理科切取手术组织总量≥25 mg（绿豆大小 ），活检组织长度>1 cm ，需 2-3 条 ，蜡块完整 ，无磕碰损伤的石 蜡包埋组织。将蜡块放入蜡块托中 ，写好样本编码。然后将该样本提交单装入自封袋 ，与样本一起常温运输。
手术/活检组织石蜡卷片
从医院病理科切取组织厚度≥8~10 μm 的石蜡卷片 ，手术组织 5-10 张（组织>1 ×1 cm2 ），或 10-20 张（组织<1 × 1 cm2 ）， 穿刺组织 20-25 张。将切好的卷片放置于 1.5 mL 无菌离心管中 ，每管最多放置 5 张 ，用封口膜将管盖封好 ，并在管壁上写 好样本编码。然后将该样本的提交单装入自封袋 ，与样本一起常温运输。
手术/活检组织石蜡切片
从医院病理科切取组织厚度≥8~10 μm 的石蜡卷片 ，手术组织 5-10 张（组织>1 ×1 cm2 ），或 10-20 张（组织<1 × 1 cm2 ）， 穿刺组织 20-25 张。将切片平整放置在经过防脱处理的粘附载玻片中心位置 ，以样本区域无褶皱、气泡或明显刀痕为准。将 贴片放置于专用的病理切片盒中 ，在贴片盒盖与盒身各写上样本编码。然后将该样本提交单 ，装入自封袋 ，与样本一起常温 运输。
注意事项：
a. 送样优先顺序：石蜡块＞石蜡卷＞石蜡切片
b. 所有石蜡组织样本需尽量送检一年以内的样本，不得超过 18 个月，建议提供一张免疫组化或组化染色切片
c. 新制切片常温放置应在 1 周以内，2-8 ℃放置应在 1 个月以内，-20 ℃贮存应在 6 个月以内
d. 强烈建议每个贴片盒中只存放一个患者的样本；若需与其他患者样本放在一起，必须做间隔区分，防止样本接触造成污染
e. 强烈不建议使用添加瓦楞纸或自折 Z 形纸摆放石蜡切片，因运输过程中的碰撞会导致石蜡切片挤到一起，造成切片破损或 样本污染。
石蜡组织容器
6. 细菌样本采集（致病菌需要灭活后提取 DNA 送样）：
一次反应所需细菌的量≤1 ×107 个
① 显微镜下观察细菌生长状态 ，收集对数期的 ；
② 将适量体积的菌液转移至 2 mL 旋盖尖底 Nuclease-Free 离心管中 ，室温或 4 ℃下 14000 g 离心 4-10 min
③ 弃尽培养基 ，将细菌沉淀迅速置于液氮速冻>1 h ，然后转移至-80 ℃或液氮中长期保存
④ 运输方式 ：干冰运输
细菌灭活法（适用于 DNA 测序）：
① 菌液体培养物混匀 ，取 3 mL 入 15 mL 离心管 ，加入 7 mL 无水乙醇混匀（至乙醇终浓度为70% ）室温处理 2 小时
② 4500 g 离心 10 min ，沉淀菌体 ，弃上清
③ 加入 1-1.5 mL 无菌 PBS 或生理盐水重悬 ，转移至 1.5 mL 离心管 8000 g 离心 10 min ，弃上清
④ 再加入 1 mL 无菌 PBS 或生理盐水重悬 ，再次 8000 g 离心 10 min ，弃上清
⑤ 沉淀可进行 DNA 提取实验或冷冻保存。
注意事项：上述体积可根据实际情况调整，需要注意的是不论体积如何，加入乙醇使终浓度是70%-75%，加入 PBS 或生理盐 水的作用是去除残余的乙醇，可增大体积或增加洗涤次数。
7. 真菌样本采集 ：
一次反应所需真菌的量≤50 mg ，将真菌称重 ，分装多管 ；将称重后的真菌置于预冷的耐-192 ℃超低温螺纹冻存管中 ， 迅速投入液氮 ，速冻时间>1 h ，转入-80 °C 长期保存或用干冰直接寄出。
8. DNA 样本
DNA 总量≥1 μg ，不降解或轻微降解 ，浓度≥30 ng/μL ，体积＞20 μL ，OD260/280 =1.7~2.2 ，一般要求主条带清晰 ， 无降解 ，如果发生部分降解 ，降解片段应在 1500 bp 以上。在管壁上写明样本编号 ，然后将该样本的提交单装入密封袋 ，与 样本一起冰袋运输。-80 ℃保存。