外显子组测序样本送样指南
1 动物组织/临床组织采集
① 取新鲜组织（50~100 mg），组织体积要小，尽量长宽高≤0.5cm，考虑到可操作性，所切组织块的大小可参考绿豆颗粒的大小；
② 去除非研究的组织类型（如结缔组织，脂肪组织等），如果是临床病变组织的取材要正确判断病变以及正常组织，应将病变组织周围的正常组织去掉，反之亦然；
③ 迅速用2-6℃预冷Nuclease-Free水配制的1×PBS或生理盐水清洗组织表面的污渍，吸干表面的液体；
④ 处理好的组织迅速放入预冷好的已写好编号的Nuclease-Free的带螺纹口的耐-192 ℃超低温冻存管中，液氮速冻1 h后于-80 ℃长期保存,在DNA提取前避免反复冻融。如只做DNA实验，没有条件的情况下可以不做液氮速冻，直接-80 ℃冻存。
注意事项：
a. 如果实验室没有条件，如缺乏液氮、干冰以及-80 ℃冰箱等条件下，需要DNA Locker及类似组织保存液保存的样本，严格按照操作说明进行，组织块需切成长宽高为0.5 cm的小块，组织块过大会影响DNA Locker渗透入组织内部的效率，组织块过大也会造成DNA Locker无法完全覆盖组织，而未被DNA Locker覆盖的组织部位极易被核酸酶降解；
b. 不允许寄送用裂解液保存的组织样本，因为实验中发现用Trizol保存的组织样本，无论是研磨好的粉末还是切割好的组织块，所抽提的DNA质量普遍很差；
c. 动物及临床组织不要使用锡箔纸包裹，锡箔纸容易与动物及临床组织粘一起，DNA抽提的过程锡箔纸容易带入，引起污染。
2 细胞样品的采集
贴壁细胞的处理
① 从培养箱取出贴壁生长细胞（3~5×106个细胞），显微镜下观察细胞确定生长状态良好。弃培养液；
② 加入无酶水配制的1×PBS后，平放轻轻摇动1 min洗涤细胞，然后弃去PBS，洗2次以洗去培养液；
③ 将培养皿置于冰上。向培养皿内加入4 ℃预冷的PBS。用干净的细胞刮棒将细胞刮于培养皿的一侧（动作要快），冰上斜置培养皿，使得缓冲液流向一侧。移液管吸取至预冷的离心管内。200-1000g离心5 min-10 min去上清；
④ 转移至耐-192 ℃低温的螺纹口冻存管，液氮速冻1 h后，转移至-80 ℃冰箱长期保存或通过干冰运输寄出。如只做DNA实验，没有条件的情况下可以不做液氮速冻，直接-80冻存。
悬浮细胞的处理
① 选取生长状态良好的细胞悬液（3~5×106个细胞）；
② 200-1000 g离心5-10 min，得到细胞沉淀弃培养基；
③ 加入3 mL Nuclease-Free水配制的1×PBS后，悬起细胞沉淀，然后用200 g离心5 min，弃PBS，洗2次；
④ 转移至耐-192 ℃低温的螺纹口冻存管，液氮速冻1 h后，-80 ℃长期保存或通过干冰运输寄出；如只做DNA实验，没有条件的情况下可以不做液氮速冻，直接-80 ℃冻存。
3 植物组织组织采集
① 选取新鲜、幼嫩、生长旺盛的组织部位（200~300 mg），植物组织越幼嫩越新鲜所含的次生代谢产物越少，随着植物的逐渐成熟，所含的次生代谢产物产量越来越多，而次生代谢产物会影响DNA的抽提；
② （部分植物样本可选做）迅速用预冷的Nuclease-Free水配制的1×PBS或生理盐水清洗组织表面的污渍，吸干表面的液体。用剪刀剪切成合适的大小（若非特殊情况，长度最好不要超过10 cm）；
③ 处理好的组织迅速放入预冷好的已写好编号的Nuclease-Free的耐-192 ℃低温的螺纹冻存管中，或用标记好名称的锡箔纸包裹好，液氮速冻>1 h，转移到-80 ℃长期保存，在DNA提取前避免反复冻融，干冰寄送样本。如只做DNA实验，没有条件的情况下可以不做液氮速冻，直接-80 ℃冻存。
4 全血/外周血样本搜集
|
|
|
紫色EDTA采血管 |
紫色EDTA采血管采集方式：
① 样本采集前，先用75%的酒精棉由内向四周对采血部位进行消毒；
② 采血2~5 mL至特定的采血管中，数量达到负压允许的最大值；
③ 样本采集完成后，立即轻柔颠倒混匀10次。动作尽可能平缓；
④ 混匀完毕后，转入耐-192 ℃低温的螺纹口冻存管，液氮速冻1 h后，转入-80 ℃冰箱保存，干冰运输。如只做DNA实验，没有条件的情况下可以不做液氮速冻，直接-80 ℃冻存。
5 石蜡组织
手术/活检组织石蜡块
从医院病理科切取手术组织总量≥25 mg（绿豆大小），活检组织长度>1 cm，需2-3条，蜡块完整，无磕碰损伤的石蜡包埋组织。将蜡块放入蜡块托中，写好样本编码。然后将该样本提交单装入自封袋，与样本一起常温运输。
手术/活检组织石蜡卷片
从医院病理科切取组织厚度≥8~10 μm的石蜡卷片，手术组织5-10张（组织>1×1 cm2），或10-20张（组织<1×1 cm2），穿刺组织20-25张。将切好的卷片放置于1.5 mL无菌离心管中，每管最多放置5张，用封口膜将管盖封好，并在管壁上写好样本编码。然后将该样本的提交单装入自封袋，与样
手术/活检组织石蜡切片
从医院病理科切取组织厚度≥8~10 μm的石蜡卷片，手术组织5-10张（组织>1×1 cm2），或10-20张（组织<1×1 cm2），穿刺组织20-25张。将切片平整放置在经过防脱处理的粘附载玻片中心位置，以样本区域无褶皱、气泡或明显刀痕为准。将贴片放置于专用的病理切片盒中，在贴片盒盖与盒身各写上样本编码。然后将该样本提交单，装入自封袋，与样本一起常温运输。
注意事项：
a. 送样优先顺序：石蜡块＞石蜡卷＞石蜡切片
b. 所有石蜡组织样本需尽量送检一年以内的样本，不得超过18个月，建议提供一张免疫组化或组化染色切片
c. 新制切片常温放置应在1周以内，2-8 ℃放置应在1个月以内，-20 ℃贮存应在6个月以内
d. 强烈建议每个贴片盒中只存放一个患者的样本；若需与其他患者样本放在一起，必须做间隔区分，防止样本接触造成污染
e. 强烈不建议使用添加瓦楞纸或自折Z形纸摆放石蜡切片，因运输过程中的碰撞会导致石蜡切片挤到一起，造成切片破损或样本污染。
石蜡组织容器
|
|
|
|
|
粘附载玻片 |
蜡块托 |
切片盒 |
石蜡切片示例
|
|
|
|
样本量少手术组织 |
样本量少穿刺组织 |
|
|
|
|
正常量手术组织 |
正常量穿刺组织 |
6 DNA样本
DNA总量≥1 μg，不降解或轻微降解，浓度≥30 ng/μL，体积＞20 μL，OD260/280=1.7~2.2，一般要求主条带清晰，无降解，如果发生部分降解，降解片段应在1500 bp以上。在管壁上写明样本编号，然后将该样本的提交单装入密封袋，与样本一起冰袋运输。-80 ℃保存。